العلوم الحياتيةالعلوم العامةتجارب علميةتجارب فسيولوجيا النبات

استخلاص الكلوروفيل وتقديره كمياً وتقدير طيف امتصاصه Chlorophyl : extraction , quantitation

الكلوروفيل : استخلاصه وتقديره كمياً وتقدير طيف امتصاصه عملياٍ

تجارب على البـنـاء الضـوئـي Photosynthesis –

تعتبر عملية البناء الضوئي من أهم العمليات البنائية في حياة النبات , فالنباتات الخضراء لها القدرة على امتصاص الطاقة الضوئية وتحويلها إلى طاقة كيميائية يستخدمها في بناء المواد الكربوهيدراتية باستخدام ثاني أكسيد الكربون والماء مع انطلاق الأوكسجين .
ومن العوامل المؤثرة على عملية البناء الضوئي :
1- الضوء .
2- توفر ثاني أكسيد الكربون .
3- الكلوروفيل .

الكلوروفيل : استخلاصه وتقديره كمياً وتقدير طيف امتصاصه
Chlorophyl : extraction , quantitation , and absorbtion spectrum

الهدف من التجربة :
أولاً: إثبات أهمية الكلوروفيل في البناء الضوئي واستخلاصه .

الأدوات والمواد اللازمة :
كؤوس زجاجية – كحول أو أسيتون – محلول اليود – أوراق نباتية مبرقشة – قمع ترشيح – هاون .

طريقة العمل :
طريقة استخلاص الكلوروفيل: أول خطوة يتم القيام بها في الدراسات الخاصة بالكلوروفيل النباتي هو استخلاصه من الخلايا النباتية وتتم هذه العملية كما يلي :
1- ضع ورقة من نبات أخضر في أنبوبة اختبار مع 10 ملل من الأسيتون 80% و اغلق الأنبوبة بسدادة لمنع تطاير الأسيتون .
2- اترك الأنبوبة لمدة 15 دقيقة مع الرج كل 5 دقائق .
3- رشح الأسيتون في قمع بخنر في ورقة ترشيح .
يمكن استخلاص الكلوروفيل بطحن كمية 10 جم من أوراق نباتية في هاون مع إضافة الأسيتون 80 % عليه ثم نقوم بالترشيح .

1 – أرسم الورقة النباتية المبرقشة بعد تعريضها لضوء الشمس مدة كافية رسماً تخطيطياً تبين فيه المساحات الخضراء والبيضاء على الورقة .
2 – اغمس الورقة لمدة دقيقة في ماء يغلي لقتل الخلايا .
3 – اغمس الورقة في الكحول أو الأسيتون إلى أن يختفي اللون الأخضر منها .
4 – أنقل الورقة إلى محلول اليود المخفف وقارن ألوانها بالرسم المرسوم سابقاً .
-نلاحظ أن المناطق التي كانت ملونة باللون الأخضر والمحتوية على الكلوروفيل مسبقاً قد تكون فيها لون أزرق قاتم نتيجة تفاعل اليود مع النشا في هذه المناطق أما المناطق غير الملونة أصلاً فلا تتلون باللون الأزرق بسبب عدم وجود النشا فيها وهذا يدل على أن للكلوروفيل دور في تكون النشا أثناء عملية البناء الضوئي .

ثانياً : تقدير الكلوروفيل :
أ – قياس كمية الكلوروفيل بقياس كمية الإمتصاص :
يتم ذلك بقياس الإمتصاص Absorbance للكلوروفيل عند طول موجي 664 نانومتر باستخدام المطياف Spectrophotometer مع الأخذ بعين الإعتبار أخذ قراءة معيارية بالمذيب المستخدم .

ب- التقدير الكمي للكلوروفيل :
بعد أخذ القراءة للإمتصاص نعوض في المعادلة التالية والتي تعطي تركيز الكلوروفيل
بالملليجرام / جم من النسيج النباتي .
تركيز الكلوروفيل = 20.2 ( قراءة الإمتصاص عند 645 ) + 8.02 ( قراءة الإمتصاص عند 663 )
× ( الحجم النهائي للمستخلص / 1000 × الوزن الطازج للنبات )

الوسوم

مقالات ذات صلة

Flag Counter
إغلاق