الأحياء الدقيقةالعلوم الحياتيةالعلوم العامةتجارب علميةتجارب في علم الأحياء الدقيقة

صبـغ الجـراثـيـم Spore staining

صبغ جراثيم البكتيريا

تهدف تجربة صبغ جراثيم البكتيريا إلى التعرف على بعض التراكيب في البكتيريا من خلال الصبغ حيث أن بعض الصبغات تستخدم لصبغ التراكيب البكتيرية لتوضيحها مثل الأسواط والأهداب وجدار الخلية و الكبسولة والجراثيم وغيرها .

طريقة تكون الجراثيم ( سبورز Spores ) في البكتيريا


والجراثيم الداخلية للبكتيريا Endospores تتكون عند تعرض الخلية البكتيرية للظروف البيئية السيئة , بحيث ينحصر البروتوبلازم عند جدار الخلية باتجاه النواة , مكوناً جداراً صلباً يتحمل الظروف القاسية كالحرارة المرتفعة والتعرض للكيماويات القاتلة لتحافظ به البكتيريا على النوع , ومن المعلوم أن هذه الجراثيم تبقى لفترات طويلة حتى تتحسن الظروف وتعيد نشاطها من جديد . مثل جنس باسيلاس Bacillus , والجنس كلوستريديوم Clostridium , وجنس سبوروسارسيناس sporosarsina .
ولا تعد هذه الجراثيم وحدات تكاثرية . وهذه الجراثيم مقاومة بطبيعتها لتقبل الأصباغ ولا يمكن لطرق الصبغ العادية التي تصبغ الخلايا الخضرية للبكتيريا أن تؤدي إلى صبغها , لذلك تستخدم الحرارة لإدخال الصبغة إلى داخل الجرثومة .
وهناك طرق عديدة لصبغ الجراثيم وفيما يلي وصف طريقتين منها :

طرق صبغ جراثيم البكتيريا


أولاً: طريقة شافر وفولتون Schaeffer & Fulton:


المواد والأدوات اللازمة:
مزارع بكتيرية متجرثمة – شرائح – إبرة تلقيح ذات العقدة – لهب – حامل – حوض – صبغة أخضر الملاكيت Malachite green 5% مائي – صبغة السفرانين – ماء مقطر – مجهر.

خطوات العمل:
1- نثبت الغشاء البكتيري من مزرعة Bacillus subtilis كما سبق .
2- نغمر الشريحة بصبغة أخضر الملاكيت 5 % ثم نسخن على اللهب حتى حدوث التبخر للصبغة دون أن تغلي الصبغة .
3- نستمر في التسخين مع مراعاة عدم جفاف الصبغة عن الغشاء وإضافة الصبغة كلما بدأت تجف وذلك لمدة 5 – 7 دقائق .
4- نصب الصبغة الزائدة في حوض الصباغة ثم نغسل الشريحة بالماء المقطر جيداً بعد أن تبرد .
5- نغمر الغشاء البكتيري بصبغة السفرانين لمدة دقيقة .
6- نغسل الشريحة بالماء ثم نجففها جيداً .
7- افحص الشريحة بالعدسة الزيتية ثم سجل النتائج .
** تظهر الخلية البكتيرية باللون الأحمر أما الجرثومة فتظهر باللون الأخضر و قد تكون الجرثومة وسطية أو طرفية .
ملاحظة : يمكن صبغ الغشاء البكتيري بدون تسخين باستخدام محلول صبغة أخضر الملاكيت بتركيز 10% بغمر الغشاء بالصبغة لمدة 20 دقيقة .

ثانياً: طريقة دورنر Dorner :

المواد والأدوات اللازمة :
أنبوب اختبار صغير – صبغة كربول الفوكسين – حمام مائي – صبغة النجروسين – شرائح .
خطوات العمل :
1- حضر معلق كثيف من خلايا البكتيريا باسيلاس سابتيلاس Bacillus sabtilis في بضع قطرات من الماء في أنبوبة اختبار صغيرة .
2- أضف كمية مماثلة من صبغة كربول الفوكسين المرشح حديثاً إلى معلق البكتيريا .
3- ضع المخلوط في حمام مائي عند 100 ْم لمدة 10 دقائق .
4- اخلط قطرة صغيرة من الخلايا المصبوغة مع قطرة صغيرة من محلول النجروسين على شريحة نظيفة ثم تفرد حتى يتكون غشاء رقيق .
5- أترك الغشاء حتى يجف ويفضل أن يجف سريعاً وذلك بتعريض الشريحة للهواء الساخن فوق اللهب .
6- إفحص الشريحة تحت المجهر ولاحظ ظهور الجراثيم بلون أحمر أما الخلية الخضرية تظهر شفافة في وسط رمادي أو أسود .

  جرثومة طرفية 
جرثومة وسطية
الوسوم

مقالات ذات صلة

Flag Counter
إغلاق