منتديات التفوق  

العودة   منتديات التفوق > منتدى العلوم > العلوم الحياتية > تقنيات نباتية وحيوانية

تقنيات نباتية وحيوانية تجارب وتطبيقات في مجال التقنيات الحيوانية والنباتية

الإهداءات

إضافة رد
 
أدوات الموضوع انواع عرض الموضوع
قديم 09-23-2012, 08:08 PM   #1
مدير عام


الصورة الرمزية admin
admin غير متواجد حالياً

بيانات اضافيه [ + ]
 رقم العضوية : 1
 تاريخ التسجيل :  Oct 2011
 أخر زيارة : اليوم (09:24 PM)
 المشاركات : 8,439 [ + ]
 التقييم :  10
افتراضي طريقة تثبيت العينات النباتية والحيوانية Fixation of plant and animal specimens



animal, العينات, النباتية, تثبيت, fixation, plant, specimens, والحيوانية, طريقة

هذه العملية مهمة لتثبيت الأنسجة والخلايا النباتية والحيوانية واحتفاظها بتكوينها وشكلها للتمكن من دراستهما بشكل جيد وواضح لأن العضو المنزوع يتعرض للمحللات مثل البكتيريا أو الإنزيمات المحللة ضمن أنسجة الكائن نفسه أو للتحلل الذاتي autolysis بفعل بعض الإنزيمات وفقد الأكسجين وتراكم الفضلات مثل ثاني أكسيد الكربون.
لذا يلزم حفظ النسيج أو العضو مباشرة عقب فصله عن الجسم للحصول على أنسجة مشابهة في التركيب للنسيج أو العضو الأصلي وذلك بعملية التثبيت fixation .
ويوجد عدة أنواع من المثبتات لكل منها ميزاته وعيوبه إلا أنه يراعى عند استخدام أي مثبت مراعاة الدراسة المطلوبة كما يراعى ما يلي :
1-أن يتخلل النسيج بسرعة لمنع التغيرات التحللية التي يمكن أن تحدث وذلك بأخذ العينة بحجم لايتجاوز 5 * 5 * 5 ملم .
2-يحول المحتويات النسيجية إلى مواد غير ذائبة .
3-يمنع النسيج من الإنكماش أو التشوه أثناء العمليات اللاحقة ( الطمر والتشريب ونزع الماء ) .
4-إعطاء النسيج درجة من الصلابة .
5- يسهل عملية الصبغ للعينات .
6-أن يكون حجم المثبت حوالي 10 أضعاف حجم النسيج .

ومن المواد المستخدمة في تحضير المثبتات :
1- حمض الخليك الثلجي .
2-الكحول الإيثيلي .
3-ثالث أكسيد الكروم .
4-الفورمالدهيد .
5-حمض البكريك .
6-ثاني كرومات البوتاسيوم .
7-كلوريد الزئبقيك .
8- رابع أكسيد الأوزوميوم .

محاليل التثبيت وطرق تحضيرها واستعمالها :
قد تستعمل محاليل مفردة في تثبيت العينات النباتية ولكن في الغالب تستخدم هذه المحاليل مركبة من عدة محاليل أولية ذات نسب ثابتة .
كما تجدر الإشارة إلى أن بعض المثبتات يمكن تحضيرها مسبقاً والإحتفاظ بها لحين الحاجة لاستخدامها ولكن بعضها لا تحضر إلا عند البدء العمل .
ومن هذه المثبتات شائعة الإستعمال ما يلي :

1-محلول الفورمالين الكحولي formalin-aceto-alcohol (FAA) .

يستعمل هذا المثبت للعينات النباتية المحتوية على العناصر الخشبية وللحشرات والقشريات ويعتبر من أكثر أنواع المثبتات شيوعاً . ويمكن ترك العينة في هذا المثبت لمدة 12 – 24 ساعة بحسب كمية المادة الخشبية الموجودة في العينة .
ويحضر هذا المحلول كما يلي :
90 مل من الكحول الإيثيلي تركيز 50% أو 70% .
5 مل من الفورمالين تركيز 40% .
5 مل من حمض الخليك الثلجي .
يلاحظ أن بعد عملية التثبيت لا بد من غسل العينة بالكحول الإيثيلي تركيز 50% أو حسب تركيز الكحول المستخدم في المثبت .

2- محلول نفاشين navaschin`s fluid :
يستعمل هذا المثبت للقمم النامية وتحضير أطوار الإنقسام غير المباشر وتوضيح الكروموسومات .
ويتكون هذا المحلول مما يلي :
75 مل من حمض كروميك بتركيز 1% .
5 مل حمض خليك ثلجي .
20 مل فورمالين .
ويوجد عدة أنواع من هذا المحلول بحسب تركيز المواد المكونة له .

3- محلول بوان Bouin`s fluid :
يستعمل هذا المثبت للعينات النباتية والحيوانية وخاصة قمم الجذور المرستيمية وهذا المثبت من الأنواع الثابتة التي يمكن الإحتفاظ بها لحين الحاجة . ويفضل بقاء العينة في هذا المحلول لمدة 12 – 48 ساعة بعد ذلك تغسل العينة بالكحول الإيثيلي 20 % .
ويستعمل فيه حمض البكريك ( ثلاثي نيتروفينول trinitrophenol ) كما يستعمل في عدة مثبتات أخرى كما سيرد لاحقاً .
ويتكون هذا المحلول مما يلي :
75 مل حمض البكريك ( مائي مشبع )
25 مل فورمالين
5 مل حمض خليك ثلجي
ويوجد عدة أنواع من هذا المحلول بحسب تركيز المواد المكونة له ومنه بوان المائي وبوان الكحولي .

4- محلول كارنوي Carnoy`s fluid :
من المحاليل المهمة في الدراسات النسيجية للنبات والحيوان وخاصة الكروموسومات والبروتينات وأجسام نسل وهو شديد السحب للماء وكذلك فهو جيد النفاذية للأنسجة .
ويتكون المحلول مما يلي :
60 مل من الكحول الإيثيلي المطلق
30 مل من الكلوروفورم
10 مل حمض خليك ثلجي
وتجدر الإشارة إلى أنه لابد من بقاء العينة في المحلول لمدة 15 – 60 دقيقة . وبعد الإنتهاء من المثبت تغسل العينة بالكحول الإيثيلي المطلق لمدة ساعتين .

5- محلول زنكر Zenker`s fluid :
يستعمل في الدراسات النسيجية النباتية والحيوانية وهو متوسط النفاذية .
ويتكون مما يلي :
100 مل ماء مقطر
5 جم ثاني كرومات البوتاسيوم ( للنبات ) و 2.5 جم ( للحيوان )
0.15 جم كلوريد الزئبقيك ( للنبات ) و 5 جم ( للحيوان )
2 مل حمض الخليك الثلجي يضاف قبل الإستعمال مباشرة
1جم كبريتات الصوديوم ( للحيوان فقط )
ويعد هذا المحلول غير ثابت لذا يفضل تحضيره قبل الإستعمال ويلزم بقاء العينة في المحلول لمدة 12 - 24ساعة ثم تغسل جيداً بالماء الجاري لمدة 10 ساعات .
6- محلول زركل Zirkle`s fluid :
يستخدم لتثبيت الأجسام السبحية ويتكون مما يلي :
400 مل ماء مقطر
2.5 جم ثاني كرومات البوتاسيوم
2.5 جم ثاني كرومات الأمونيوم
2 جم كبريتات النحاس
ويلزم وضع العينة في هذا المحلول لمدة 24 – 48 ساعة ثم تغسل بالماء المقطر جيداً عدة مرات .
7- مخلوط حمض الكروميك الخلي
يستخدم لتثبيت الطحالب والفطريات والحزازيات إذا كان ضعيف التركيز والمبايض وقمم الجذور إذا كان متوسط التركيز ويجب بقاء العينة في هذا المحلول لمدة 24 ساعة ثم تغسل بالماء الجاري .
ويتكون هذا المحلول مما يلي :
حمض الكروميك 2.5 مل ( ضعيف ) أو 7 مل ( متوسط)
حمض الخليك 5 مل ( ضعيف ) أو 10 مل ( متوسط )
ماء مقطر 92.5 مل ( ضعيف ) أو 83 مل ( متوسط )

8- الكحول الإيثيلي الخلي ( مثبت فارمر )
ويستخدم للدراسات النسيجية وخاصة تثبيت الكروموسومات وتوضع فيه العينة لمدة 24 ساعة لتظهر الكروموسومات واضحة .
ويتكون ممايلي :
75 مل كحول إيثيلي مطلق
25 مل حمض خليك ثلجي

9- الفورمالدهيد formaldehyde :
الإسم التجاري له الفورمالين مذاباً في الماء بتركيز 40% ولابد من تخفيفه إلى 5 – 10 % فورمالين ويمكن استعماله كمادة حافظة إلا أنه مع طول الزمن يتعكر ويمكن تصفيته بالترشيح .
كما يمكن استخدامه للعينات النباتية بالتركيزات التالية :
* ( صيغة بيكر ) ( فورمالين 10 مل + 10 مل من محلول مائي من كلوريد كالسيوم لامائي 10 % + ماء مقطر 80 مل ) وذلك لتثبيت الأنسجة العصبية والمواد الدهنية .
* طريقة ليلي lillie لتحضير محلول من الفورمالدهيد الذي يعطي مثبتاً متوافقاً مع الضغط الأسموزي للخلايا وهي كما يلي :
ماء مقطر 900 مل
فوسفات الصوديوم ثنائي الهيدروجين ( لامائي ) Nah2po4 3.5 جم
فوسفات ثنائي الصوديوم أحادي الهيدروجين ( لامائي ) na2hpo4 6.5 جم
فورمالين 100 مل
وتثبت العينة لمدة 24 ساعة . أما للحفظ فتحفظ العينات لمدة غير محدودة .
* الفورمالين الملحي ( فورمالين 10 مل + كلوريد صوديوم 0.85 جم + 90 مل ماء مقطر )
ملاحظات : للفورمالين بعض العيوب التي تؤخذ عليه كبعض التأثيرات على العين والجلد والجهاز التنفسي لذا لابد من أخذ الحيطة أثناء التعامل معه .
بعض الأنسجة الغنية بالدم كالكبد والطحال يتكون عليها بقع بنية قاتمة ويمكن التخلص منها بمعالجة الأنسجة بمحلول هيدروكسيد البوتاسيوم 1 % محضر بكحول تركيزه 80 % .



10- محلول فلمنج بدون حمض خل ( جاتنبي ) flemming without acetic :
يستخدم للأنسجة النباتية الرقيقة لبطء نفاذيته للأنسجة النباتية ويتكون مما يلي :
15 مل من 10% حمض الكروميك
4 مل من 1% حمض الأزميك
وتوضع العينات النباتية لمدة 1 – 24 ساعة حسب العينة النباتية ثم تغسل العينة بالماء الجاري لمدة 2 – 5 ساعات .
أما العينة الحيوانية 5 مل من 15 % كلوريد صوديوم للافقاريات البحرية أو 1 مل من 15 % كلوريد الصوديوم في الحيوانات الأخرى ثم تغسل العينات كما في النبات .

11- محلول ألن Allen`s fluid :
يستعمل لمعظم الأنسجة النباتية التي لا تحتوي على عناصر خشبية ويتكون مما يلي :
75 مل محلول مائي مشبع لحمض البكريك
25 مل فورمالين
5 مل حمض خليك ثلجي
1.5 مل حمض كروميك
2 جم يوريا
يجب وضع العينة في هذا المحلول 4 – 16 ساعة ثم تنقل العينة إلى كحول إيثيلي 70% وتكرر هذه العملية عدة مرات ويفضل تحضيره عند الإستعمال لسعة تلفه .

12- محلول الفورمالين والكحول ( مكرر )
يستعمل لدراسة أنابيب حبوب اللقاح ويتكون مما يلي :
100 مل من الفورمالين
900 مل كحول إيثيلي تركيز 70 %
ويستخدم هذا المحلول لمدة 3 – 6 ساعات ويمكن استخدامه كمادة حافظة .

13- محلول سانفيليس Sanfelice`s fluid :
يستعمل لدراسة الكروموسومات في عملية الإنقسام الخلوي وهو محلول غير ثات ويحضر كما يلي :
مجموعة ( أ ) 100 مل من 2% حمض كروميك مائي
60 مل من 2% حمض خليك ثلجي
مجموعة ( ب ) 100 مل فورمالين
60 مل ماء مقطر
يمزج حجم متساوي من ( أ ) و ( ب ) قبل الإستعمال مباشرة وتوضع العينة لمدة ساعة ثم تغسل بالماء جيداً .
14- مثبت ألتمان altimann`s fixation :
مثبت جيد للدهون والميتوكوندريا في الحيوان إلا أنه يجعل الأنسجة هشة ويستخدم لمدة 12 ساعة ثم تغسل العينة بالماء لإزالة الزائد من حمض الأوزميك .
ويتكون مما يلي :
5 % محلول مائي من ثنائي كرومات البوتاسيوم 10 مل
2 % محلول مائي من حمض الأوزميك 100 مل

15- مثبت أورث orth`s fluid :
يحضر قبل الإستعمال مباشرة ويستخدم لتثبيت الميتوكوندريا وأجسام جولجي وكريات الدم الحمراء ومدة التثبيت 24 – 48 ساعة ثم يغسل بالماء الجاري مدة 12 ساعة وهو من المثبتات التي يدخل فيها الكرومات .
ويتكون مما يلي :
فورمالين 10 مل
محلول موللر ( يحضر من بيكرومات البوتاسيوم 2.5 جم + كبريتات الصوديوم 1 جم + ماء مقطر 100 مل ) ويستخدم منه 100 مل .
ويمكن تحضيره كما يلي :
فورمالين 10 مل
ثنائي كرومات البوتاسيوم 22,5 جم
ماء مقطر 100 مل

16- مثبت أياما aoyama fluid :
يستخدم لتثبيت جهاز جولجي للخلايا الحيوانية ويستخدم لمدة 2 – 3 ساعات ثم يغسل بالماء ويتكون من :
كلوريد الكادميوم 1 جم
فورمالين 15 مل
ماء مقطر 85 مل


17- محلول جندر gendre`s fluid :
مثبت جيد للجلايكوجين ويستخدم لمدة 24 ساعة ثم تغسل العينة جيداً قبل الإستخدام .
ويتكون مما يلي :
كحول إيثيلي مشبع بحمض البكريك 80 مل
فورمالين 15 مل
حمض خليك ثلجي 5 مل

18- سبلمت أسيتيك sublimate acetic :
مثبت جيد للديدان المفلطحة ويتكون من :
كلوريد زئبقيك مشبع في محلول ملحي فسيولوجي 100 مل
حمض خليك ثلجي 5 مل

19- مثبت تشامبي champy fixative :
3 % محلول مائي من بيكربونات البوتاسيوم 7 مل
1 % محلول مائي من حمض الكروميك 7 مل
2 % محلول مائي من حمض الأوزميك 4 مل
يحضر قبل الإستعمال مباشرة يعتبر مثبت جيد للميتوكوندريا والدهون والحيوانات الأولية ويراعى غسل العينة بالماء بعد التثبيت .

20- مثبت دافانو Dafano fixative :
نيترات الكوبالت 1 جم
فورمالين 15 مل
ماء مقطر 100 مل
مثبت جيد لجهاز جولجي ويراعى غسل العينة بعد التثبيت .

21- رابع أكسيد الأوزميوم Osmium tetroxide :
يستخدم محلول 2 % من رابع أكسيد الأوزميوم لتثبيت الحيوانات الأولية .

22- مثبت روثمان Rossman fixative :
كحول مطلق مشبع بحمض البكريك 90 مل
فورمالين 10 مل
مناسب لتوضيح الجليكوجين ويستخدم لمدة 12 – 24 ساعة وتغسل بعده العينات في 95 % كحول .

23- مثبت سميث Smith fixative :
بيكرومات البوتاسيوم 5.5 جم
فورمالين 10 مل
ماء مقطر 87.5 مل
حمض خليك ثلجي 2.5 مل
يحضر قبل الإستعمال مباشرة ويستعمل للعينات الغنية بالمح لمدة 24 ساعة ثم تغسل العينات بالماء الجاري لمدة 12 ساعة ثم توضع العينات في 4 % فورمالين لمدة 12 – 48 ساعة ثم تجرى عملية نزع الماء بتركيزات متصاعدة من الكحول ثم تروق العينة بالبنزين أو زيت السيدر .

24- مثبت سنا Sinha fixative :
حمض بكريك مشبع في 90 % كحول 75 مل
فورمالين 25 مل
حمض نيتريك مركز 5.5 مل
يستعمل مع الحشرات لتليين الأجزاء الجامدة مع عدم الإضرار بالأجزاء الداخلية ثم تنقل العينات إلى 95 % كحول .

25- محلول سوزا ( هايدن هان ) Susa fluid :
كلوريد الزئبقيك 45 جم
كلوريد صوديوم 5 جم
ثلاثي كلور حمض الخليك 20 جم
حمض الخليك 40 مل
فورمالين 200 مل
ماء مقطر 800 مل
له قدرة عالية على تخلل الأنسجة ولايسبب جفاف العينة وتوضع فيه العينة لمدة 24 ساعة ويجب إزالة كلوريد الزئبقيك من الأنسجة بالغسيل في الماء .

26- مثبت شاودن Schaudinn`s fluid :
محلول مائي مشبع من كلوريد الزئبقيك 66 مل
95 % كحول إيثيلي 33 مل
حمض خليك ثلجي 5 مل
يستعمل في تثبيت الحيوانات الأولية لمدة 15 – 20 دقيقة ولايستخدم لتثبيت الأنسجة .




 

رد مع اقتباس
إضافة رد

الكلمات الدليلية (Tags)
animal, العينات, النباتية, تثبيت, fixation, plant, specimens, والحيوانية, طريقة


الذين يشاهدون محتوى الموضوع الآن : 6 ( الأعضاء 0 والزوار 6)
 
أدوات الموضوع
انواع عرض الموضوع

تعليمات المشاركة
لا تستطيع إضافة مواضيع جديدة
لا تستطيع الرد على المواضيع
لا تستطيع إرفاق ملفات
لا تستطيع تعديل مشاركاتك

BB code is متاحة
كود [IMG] متاحة
كود HTML متاحة

الانتقال السريع

Bookmark and Share


الساعة الآن 09:38 PM

أقسام المنتدى

المنتدى الإسلامي Islamic Forum | علوم القران الكريم Quran sciences | تفسير القران الكريم | علوم الحديث | ثقافة اسلامية | منتدى اللغة العربية والآداب | الشعر | قصص أدبية | الحكم والأمثال | منتدى العلوم | العلوم الحياتية | الأحياء الدقيقة | العلوم الطبيعية | المنتدى العام | منتدى الثقافة العامة | المنتدى الصحي | الصحة العامة | الغذاء والصحة - الطب البديل - العلاج بالاعشاب والغذاء | صحة الطفل | منتدى المعلم | خطط وتحليل محتوى التربية الإسلامية | خطط و تحليل محتوى للمواد العلمية | منتدى الطلاب | منتدى امتحانات الطلاب | قسم التوظيف والوظائف | قسم الأبحاث الطلابية | الثانوية العامة التوجيهي | اهتمامات المعلم | خطط وتحليل محتوى اللغة العربية | خواطر وحوارات أعضاء المنتديات | سؤال وجواب - سين - جيم Questions and Answers | منتدى التدريب و التطوير | أسئلة وأجوبة لمواد التوجيهي | خطط وتحليل محتوى اللغة الإنجليزية | خطط وتحليل محتوى لمادة الحاسوب | خطط وتحليل محتوى لمواد الإجتماعيات | خطط وتحليل محتوى التربية المهنية والفنية والرياضية والثقافة المالية | تجارب في علم الأحياء الدقيقة | منتدى الأمراض وعلاجها | منتديات البيت العربي | منتديات المرأة العربية | منتديات الرجل العربي | منتدى المطبخ العربي | مستلزمات البيت العربي | منتدى الأدعية والمأثورات | أسئلة واجوبة اجتماعيات | شخصيات وأعلام | السياحة والسفر | تجارب فسيولوجيا النبات | تجارب في فسيولوجيا الإنسان والحيوان | تقنيات نباتية وحيوانية | أسئلة وأجوبة رياضيات | اسئلة واجوبة فيزياء | اسئلة واجوبة كيمياء وعلوم أرض | أسئلة وأجوبة أحياء وثقافة عامة | أسئلة وأجوبة عربي - لغة عربية | أسئلة وأجوبة دين وعلوم اسلامية | اسئلة واجوبة حاسوب | الخدمات العامة | أسئلة واجوبة انجليزي | أسئلة امتحانات عربي للمراحل الأساسية | أسئلة امتحانات مواد علمية للمراحل الأساسية | أسئلة امتحانات حاسوب للمراحل الأساسية | أسئلة امتحانات انجليزي للمراحل الأساسية | أسئلة امتحانات اجتماعيات ومهني للمراحل الأساسية | أبحاث جامعية | أبحاث لطلاب المدارس في التخصصات العلمية | أبحاث لطلاب المدارس في التخصصات الأدبية | الأدوية والمستحضرات الصيدلانية | المضادات الحيوية | المسكنات ومضادات الألم ومخفضات الحرارة | أدوية الدم والقلب والأوعية الدموية | أدوية الأنف والأذن والحنجرة وأدوية الجهاز التنفسي | خطط منوعة - تخصصات مختلفة | قسم رياض الأطفال | قصص شعبية | قصص خيالية | قصص واقعية | قصص اسلامية | أسئلة وأجوبة في العلوم والرياضيات Questions and Answers in science and math | أسئلة وأجوبة في التاريخ والجغرافيا Questions and Answers in geography and history | أسئلة وأجوبة دينية Questions and Answers in relision | أسئلة وأجوبة في اللغة العربية واللغات الأخرى Questions and Answers in languages | أسئلة وأجوبة في الرياضة Questions and Answers in sports | تحضير دروس يومي لجميع المواد | قسم أوراق العمل لجميع المواد | قسم نتائج التوجيهي - نتائج الثانوية العامة | طلاب الشامل - أخبار ونماذج من أسئلة السنوات السابقة لامتحان الشهادة الجامعية المتوسطة | منتدى اللغة العربية العام | قسم امتحانات تيميس وبيسا timss and PISA | أسئلة وأجوبة عامة | أسئلة وأجوبة أحداث وتواريخ | قسم التربية الخاصة وعلم النفس | خطط وتحليل محتوى الرياضيات - الفصل الأول والثاني | خطط وتحليل محتوى فيزياء - الفصل الأول والثاني | خطط وتحليل محتوى الكيمياء- الفصل الأول والثاني | خطط وتحليل محتوى العلوم الحياتية - الفصل الأول والثاني | خطط وتحليل محتوى علوم الأرض- الفصل الأول والثاني | أسئلة امتحانات التربية الاسلامية للصفوف الأساسية | وظائف تعليم وتدريس | وظائف هندسية - وظائف فنية | وظائف ادارة ومحاسبة | وظائف كمبيوتر وبرمجة | وظائف منوعة | وظائف طبية |



Powered by vBulletin™ Version 3.8.7
Copyright © 2019 vBulletin Solutions, Inc. All rights reserved.
.:: تركيب وتطوير مؤسسة نظام العرب ::.
خاص بمنتديات التفوق - يرجى ذكر المصدر عند الإقتباس
This Forum used Arshfny Mod by islam servant